Gracias por tus datos, me parece un buen método. En cuanto a que viertes el agar en frío, yo también lo hago, pero me he llevado algunas decepciones debido a que después de trabajar durante 4 horas haciendo los preparativos, al día siguiente me encuentro con que la mitad de los frascos o tubos no gelatinizaron. Tuve uqe abrir de nuevo cada frasco y tubo para verterles una pizca de agar y volverlo a esterilizar; esta vez tuve un 100% de gelatinización, pero creo que me pasé de la dosis. El producto que uso es el P748 para replante de Phytotec Labs, y contiene agar; pero la gelatinización parcial que tuve pienso que se debe a que al estar vertiendo el medio de cultvo en los frascos, el polvo se asentaba, y por consiguiente no aplicaba una dosis heterogenea de agar a cada frasco, por lo que algunos tenían dosis mayores mientras que en otras las dosis aplicadas no lograban gelatinizar el medio. A partir de ahora deberé calentar a 90°C el medio antes de vertirlo a los frascos para tener un medio más heterogeneo.
La necesidad es la madre de la inventiva. Tengo otra idea, pero tendré que hacerle al artesano. Voy a comprar alambre galvanizado de distintos calibres para hacer una canasta-rejilla para tubos del tamaño de la olla de presión; creo que resultará bien soldar los alambres con estaño. Jesús Choy Mis fotos: http://www.flickr.com/photos/jesuschoy/ ----- Original Message ---- From: Luis Mendoza <[EMAIL PROTECTED]> To: [email protected] Sent: Saturday, September 6, 2008 7:33:26 PM Subject: [orquidea] Esterilización en horno de convección. JESUS **** Hola Jesús !!!! Hay distintos métodos para estrilizar substancias y materiales. Los medios fisicos son, sin embargo, lo que han demostrado mejor rendiemiento, en especial cuando se mezclan varios factores de este tipo ( vapor, presión y calor ). Es por esta razón por ejemplo, que en medicina el método que se usa primordialmente para esterilziar sigue siendo el autoclave. Es obvio que la introducción de algunos materiales sintéticos ( sobre todo ), en el campo de la medicina y en general de la biología urgieron la necesidad de buscar una alternativa que no usase calor para esterilzar, están entonces los medios quimicos, que usan algunos gases que pueden venir licuados incluso en forma de ampulas y se vacian en recipientes dentro de los cuales está el objeto que tu quieres esteriliziar. Estos ultimos tienen un gran riesgo: son cangerígenos, es por eso que su uso a nivel " doméstico ", no es recomendable. Los dentistas usan una especie de horno para esterilizar su material, pero desconozco que temepraturas alcanza y no se si el medio de cultivo tolerase, sin sufrir daño, tales temepraturas, habria que consultarlo. En resúmen, hoy por hoy elmejor método caseo es la olla de pesión. Otra cosa, en la olla de presión el medio creo que no hierve, probablemente en el horno si lo haga. Todo esto, claro, salvo mejor opinión. Para eserilizar los tubos he conseguido un traste de plástico, que quepa dentro de la olla, y al que he recortado a tal altura que unos 6 cm de la parte alta del tubo salgan . Las tapas de policarbonato me dieron mucho problemas ( escape de humedad ) en el calor, es por eso que previo a todo corto trozos de papel aluminio, los doblo de tal forma que queden dos tapas por fragmento, coloco el centro del aluminio en la boca del frasco y con presion de la mano hago la tapa ( claro tantas como vaya a ocupar ), las retiro del tubo teniendo cuidado de no doblarlas para que al colocarlas nuevamente embonen perfectamente el el tubo. Coloco tantos tubos como ocupe en el trasto de plástico, si son pocos, con un campo ( o cualquier articulo de algoón ) ejerzo presion sobre los frascos para que no caigan. Lleno los tubos con el medio, sello con el aluminio y " presento " fonalmente la tapa de policarbonato en cada uno de ellos. Otra opción es que en otro trasto esterilices las tapas colocadas " bocabajo " y despues un ayudante te las ira pasanto, sin tocarlas claro, para que tu termines de cerar cada frasco con la tapa despues de haber repicado. He visto en laboratorios de micropropagacion que no usan tapas, solo el aluminio bien sellado por presion y aveces colocan algo asi como parafilm para sellar. En lo personal nunca he dejado solo el aluminio. **** OJO. La cara del papel aluminío que " ve " hacia el medio de cultivo debe ser la brillante, la cara opoca sufre degradación, que al mezclarse con el vapor y gotear, mata al tejido. Una vez que he llenado todos los frascos, envuelvo en dos campos ( como ya comenté hace algunos meses sobre técnica para preparar material ). Si voy a repicar por la tarde preparo todo por la mañana, y si voy a hacerlo por la mañana, preparo la noche previa. En este caso puedo esterilizar 50 tubos por " tanda " Para introducir el bulto de los tubos a la olla, coloco a este sobre un tercer pedazo de tela, llevo cada esquina al centro, para hacer una especie de " envoltorio de cigueña " y no quemarme tampoco al sacarlo de la olla caliente. Te comento que tampoco uso tapones de algodón porque dejan escapar la humedad y suelen contaminarse facilmente con hongos, lo que da mucho problema o mas trabajo cuando requieres de un segundo repique. Otro detalle, al agar suele ser caro, hay uno de marca DIBICO, muy bueno y barato ( 100gr unos 270 pesos ), y solo agrego entre 6 y 7 gramos por litro de medio, la gelatina queda de excelente consistencia y la mezclo desde que todo esta al temperatura ambiente, no espero a que se caliente. El calentamiento lo hago cuando esta todo mezclado. Dejo trabajar la olla 25 minutos, a partir de momento en que ha alcanzado la presión que permite el escape de vapor por la pesa. Espero te sirvan los datos, cierto es algo laborioso pero creo que de este modo tienes la certeza de que has matado todos los germenes y no has deteriorado el medio. Envio dos imágenes, espero y e sirvan, estan tomadas con flash y esto no me gusta, de cualquir modo estoy a tus ordenes. Por cierto, hay 30 G. skinneri nuevas producto de las semillas que me enviaste hace un año, lucen muy bien y ya tienen dos semanas fuera del frasco. saludos un abrazo !!!! luis --- El sáb 6-sep-08, Jesus Choy <[EMAIL PROTECTED] com> escribió: De:: Jesus Choy <[EMAIL PROTECTED] com> Asunto: Re: [orquidea] Esterilizació n en horno de convección. A: [EMAIL PROTECTED] s.com.mx Fecha: sábado, 6 septiembre, 2008, 5:55 pm Hola Salvador y Alejandro. Mi problema es de tiempo, tengo más de cien tubos de ensayo y más de 40 frascos para esterilizar; los frascos los esterilizo en una olla de presión en dos etapas; el problema es con los tubos de cultivo que miden 25 x 150 mm cada uno y tengo que hacer malabares para poder esterilizarlos en la olla con riesgo de romper algunos tubos, ya que no tengo una base especial para tubos que quepa en la olla, por eso estoy buscando los parámetros que me permitan esterilizar todo el conjunto en una sola etapa en un horno de estufa. Ayer hice mi primera esterilizació n de frascos y tubos en horno, veremos qué pasa. El tiempo y temperaturas que usé fue de 120-150°C por 20 minutos. Jesús Choy Mis fotos: http://www.flickr. com/photos/ jesuschoy/ ----- Original Message ---- From: Salvador Sanchez Teran <sanchezteran2000@ yahoo.com. mx> To: [EMAIL PROTECTED] s.com.mx Sent: Saturday, September 6, 2008 10:34:34 AM Subject: Re: [orquidea] Esterilizació n en horno de convección. Jesus Ni le busques, lo mas pràctico es la olla de presion,l5 minutos despues de que comience a silvar la olla, Se que hay un metodo poniendo dentro de los frascos pastillas de Formol y cerrar los frascos por un tiempo, solo que en mexico no pude conseguir por ningun lado las famosas pastillas para experimentarlo. Suerte Salvador --- El vie 5-sep-08, Jesus Choy <[EMAIL PROTECTED] com> escribió: De:: Jesus Choy <[EMAIL PROTECTED] com> Asunto: [orquidea] Esterilizació n en horno de convección. A: "Grupo Orquídea" <[EMAIL PROTECTED] s.com.mx> Fecha: viernes, 5 septiembre, 2008, 8:28 pm Hola a todos. Estoy probando otros métodos de esterilizació n de medios de cultivo in vitro y quisiera pedirles a los que usan el horno de convección (estufa). ¿Qué temperatura usan y por cuanto tiempo? Jesús Choy Mis fotos: http://www.flickr. com/photos/ jesuschoy/ ____________ _________ _________ _________ _________ __ Correo Yahoo! Espacio para todos tus mensajes, antivirus y antispam ¡gratis! Regístrate ya - http://correo. yahoo.com. mx/ ____________ _________ _________ _________ _________ __ Correo Yahoo! Espacio para todos tus mensajes, antivirus y antispam ¡gratis! Regístrate ya - http://correo. yahoo.com. mx/
